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首页 > 产品中心 > Anti -TLR2 Rabbit pAb
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Anti -TLR2 Rabbit pAb

货号:GB11518

品牌:
目标价:¥500 促销价:
  • IHC、IF
  • Rat,M
  • 1:1000
订购规格:
  • 100ul
订购数量:

Product Information


Description

TLR2 rabbit polyclonal

Protein full name

Toll-like receptor 2

Synonyms

TLR2, CD282, TIL4, toll like receptor 2

ImmunogenKLH conjugated Synthetic peptide corresponding to Human TLR2.
IsotypeIgG
PurityAffinity purification
Subcellular location

Membrane

Uniprot IDQ9QUN7





Applications


Applications

IHC,IF

Species

Mouse,Rat

Dilution

1:1000

Positive tissue

spleen, lymph





Background


        TLR2 is a member of the Toll-like receptor (TLR) family, which plays a fundamental role in pathogen recognition and activation of innate immunity. TLRs are highly conserved from Drosophila to humans and share structural and functional similarities, while the various TLRs exhibit different patterns of expression. This gene is expressed most abundantly in peripheral blood leukocytes, and mediates host response to Gram-positive bacteria and yeast via stimulation of NF-κB. In the intestine, TLR2 regulates the expression of CYP1A1, which is a key enzyme in detoxication of carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons such as benzo(a)pyrene.

    



Images


内页M脾 TLR2 142318020602 1:1000_40.0x-2.jpg

Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded mouse spleen using TLR2 (GB11518) at dilution of 1:1000



内页R淋巴 TLR2 142318020602 1:1000 _40.0x.jpg

Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded rat lymph using TLR2 (GB11518) at dilution of 1:1000

 



内页R脾 TLR2 142318020602 1:1000_40.0x.jpg

Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded rat spleen using TLR2 (GB11518) at dilution of 1:1000




Storage


StorageStore at -20 ℃ for one year. Avoid repeated freeze/ thaw cycles.
Storage BufferPBS with 0.02% sodium azide, 100 μg/ml BSA and 50% glycerol. 




NOTE: This product is intended for research only.




实验操作步骤

一、石蜡切片免疫组化实验步骤

主要实验试剂


试剂

厂家

货号

操作

无水乙醇

国药集团化学试剂有限公司



二甲苯

国药集团化学试剂有限公司



EDTAPH9.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1203

订购

EDTA(PH8.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1206

订购

柠檬酸(PH6.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1202

订购

PBS缓冲液

赛维尔生物

G0002

订购

双氧水

国药集团化学试剂有限公司



BSA

赛维尔生物

G5001

订购

正常兔血清

赛维尔生物

G1209

订购

苏木素染液

赛维尔生物

G1004

订购

分色液

赛维尔生物

G1039

订购

返蓝液

赛维尔生物

G1040

订购

中性树胶

国药集团化学试剂有限公司


订购

免疫组化试剂盒

赛维尔生物

G1210

订购



石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯15min-二甲苯15min-无水乙醇5min-无水乙醇5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

抗原修复:组织切片置于盛满修复缓冲液的抗原修复盒中于微波炉内进行抗原修复,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min

阻断内源性过氧化物酶:切片放入3%过氧化氢溶液,室温避光孵育25 min将玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min

BSA或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min。

加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

加二抗:玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加组化试剂盒内与一抗相应种属的二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min

DAB显色:玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。

复染细胞核:Harris苏木素复染3min左右,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。

脱水封片:将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --无水乙醇6min -无水乙醇6min -二甲苯5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

显微镜镜检,图像采集分析。



 

二、石蜡切片免疫荧光实验步骤

主要实验试剂


试剂

厂家

货号

操作

无水乙醇、二甲苯

国药集团化学试剂有限公司



EDTAPH8.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1206

订购

EDTA(PH9.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1203

订购

柠檬酸(PH6.0)抗原修复液

赛维尔生物

G1202

订购

PBS缓冲液

赛维尔生物

G0002

订购

BSA

赛维尔生物

G5001

订购

荧光二抗FITCCY3

赛维尔生物

GB2

订购

DAPI

赛维尔生物

G1012

订购

抗荧光淬灭封片剂

赛维尔生物

G1401

订购



石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯15min-二甲苯15min-无水乙醇5min-无水乙醇5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液PH9.0的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min(修复液和修复条件根据组织来确定)

加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

加二抗:玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min

DAPI复染细胞核:玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min

封片:玻片置于PBSPH7.4中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。

 


三、Western Blot实验步骤

主要试剂


试剂

厂家

货号         裂解液体系

操作

RIPA裂解液

赛维尔生物

G2002         1 ml

订购

50*cooktail

赛维尔生物

G2006         20 ul

订购

PMSF100mM

赛维尔生物

G2008         10 ul

订购

磷酸化蛋白酶抑制剂

赛维尔生物

G2007        10ul

订购

BCA蛋白定量检测试剂盒

赛维尔生物

G2026

订购

5*蛋白上样缓冲液

赛维尔生物

G2013

订购

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

赛维尔生物

G2003

订购

蛋白Marker

Therm

26616

订购

TRIS

赛维尔生物

G5009

订购

甘氨酸

赛维尔生物

G5010

订购

SDS

赛维尔生物

G5037

订购

PVDF膜 0.45um

millipore

IPVH00010


PVDF膜 0.22um

millipore

ISEQ00010


脱脂奶粉

国产

G5002

订购

BSA

赛维尔生物

G5001

订购

TWEEN 20

Sigma



ECL

赛维尔生物

G2014

订购

显影定影试剂

赛维尔生物

G2019

订购

β-actin

赛维尔生物

GB12001

订购

GAPDH

赛维尔生物

GB12002

订购

Histone H3

赛维尔生物

GB11026

订购

HRP标记山羊抗兔

赛维尔生物

GB23303

订购

HRP标记抗山羊

赛维尔生物

GB23404

订购

HRP标记山羊抗小鼠

赛维尔生物

GB23301

订购

HRP标记山羊抗大鼠

赛维尔生物

GB23302

订购

转移缓冲液

赛维尔生物

G2017

订购

电泳缓冲液

赛维尔生物

G2018

订购

TBS缓冲液

赛维尔生物

G0001

订购



 细胞总蛋白提取

对于悬浮细胞: 离心收集细胞,每106细胞加250 ul  RIPA(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),振荡。如果需要提高蛋白浓度,可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

对于贴壁细胞:

1、TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。

2、加入适当体积的 RIPA(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)于培养板、瓶内3-5min。期间反复晃动培养板、瓶,使试剂与细胞充分接触。

3、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下,收集到1.5ml离心管中。

4、冰浴30min,期间用移液器反复吹打,确保细胞完全裂解。

5、12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白溶液。

组织蛋白提取:

1、组织块用冷TBS洗涤2-3次,去除血污,剪成小块置于高速组织研磨仪。加入10倍组织体积本试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)匀浆。如果需要提高蛋白浓度,可以适量减少该试剂体积。

2、将匀浆液转移至1.5ml离心管中,振荡。冰浴30min,期间用移液器反复吹打,确保细胞完全裂解。

3、12000g离心5min,收集上清,即为总蛋白溶液。

蛋白浓度测定BCA蛋白浓度

SDS-PAGE电泳

清洗玻璃板

灌胶与上样

1、将玻璃板对齐后放入夹中卡紧,操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶。

2、按实验安排配制分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。大约45min后可倒去胶上层水并用吸水纸将剩余水吸干。


分离胶配比


 


分离胶浓度

试剂

8%

10%

12%

15%

18%

20%

8%

10%

12%

15%

18%

20%

H2O   ml

4.63

4

3.3

2.3

1.3

0.63

6.9

5.9

4.9

3.4

1.9

0.9

30%丙烯酰胺(291) ml

2.67

3.3

4

5

6

6.67

4

5

6

7.5

9

10

1.5M TRISHcl(PH 8.8) ml

2.5

2.5

2.5

2.5

2.5

2.5

3.8

3.8

3.8

3.8

3.8

3.8

10SDS ml

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

AP  ml

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

TEMED  ul

5ul

5ul

5ul

5ul

5ul

5ul

7.5ul

7.5ul

7.5ul

7.5ul

7.5ul

7.5ul

总体积 ml

10ml

15ml



5%浓缩胶配比


 

试剂

浓度   5%

H2O ml

2

3

4

6

30%丙烯酰胺(291ml

0.5

0.75

1

1.5

1M  TRISHcl(PH 6.8)ml

0.5

0.75

1

1.5

10SDS ul

40

60

80

120

AP  ul

30

45

60

90

TEMED  ul

4ul

6ul

8ul

12ul

总体积 ml

3ml

4.5ml

6ml

9m 




1、按前面方法配5%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。

2、加足够的电泳液后上样电泳。将样品加入电泳孔中,电泳。浓缩胶电压75V,分离胶用120V。电泳至溴酚蓝刚跑出即可终止电泳,进行转膜。

 

转膜  (小于20kd的蛋白请使用0.22umPVDF膜。

1、准备67×9cm的滤纸和一张大小适中的 PVDF膜,PVDF膜在使用之前要先用甲醇活化。

2、在加有转移液的盆里放入转膜用的夹子,两块海绵垫,一支玻棒,滤纸和经过活化的PVDF膜。

3、将夹子打开使黑的一面保持水平。在垫子上垫海绵、三层滤纸。

4、小心剥下分离胶盖于滤纸上,将膜盖于胶上,并除气泡。在膜上盖三张滤纸并除去气泡。最后盖上另一个海绵垫。

转膜条件(湿转)

1、快转300mA恒流转膜半小时,或者200mA转膜1小时,时间可以略微调整,时间对应调整。

2、慢转转膜过夜,25V恒压转膜过夜。

 

免疫反应

1、将转好的膜于室温下脱色摇床上用5%的脱脂牛奶(0.5%TBST),封闭1h

2、稀释一抗(TBST溶解的5%脱脂牛奶,磷酸化蛋白使用TBST溶解的5%BSA),4孵育过夜(快转),或者4孵育抗体3小时(慢转)。

3、TBST在室温下脱色摇床上洗三次,每次5min

4、将二抗用TBST稀释3000倍,室温下孵育30min后,用TBST在室温下脱色摇床上洗三次,每次5min


化学发光 ECLAECLB两种试剂在离心管中等体积混合,将PVDF膜的蛋白面朝上与此混合液充分接触,1-2min后,去尽残液,包好,放入暗匣中曝光。最后用显影、定影试剂进行显影和定影。根据不同的光强度调整曝光条件。


凝胶图像分析 将胶片进行扫描存档,图像处理软件整理去色,图像分析软件处理系统分析目标带的光密度值。



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