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Transwell侵袭

货号:GC1015

品牌:Servicebio

价格:¥180

规格:

简介: Transwell作为一项实验技术,其主要材料是transwell小室,其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层有一张具有通透性的膜,这层膜带有微孔,孔径大小从0.1-12μm不等。根据不同需要有不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜。

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  一、实验简介

  Transwell作为一项实验技术,其主要材料是transwell小室,其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层有一张具有通透性的膜,这层膜带有微孔,孔径大小从0.1-12μm不等。根据不同需要有不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜。将transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室。上室装上层培养液,下室内装下层培养液,二者以transwell小室底部的聚碳酸酯膜相隔。细胞种在上室,可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。运用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,可以进行细胞共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等各种研究。

  Transwell细胞迁移实验

  常用8.0、12.0μm孔径的膜,上室种细胞(一般为肿瘤细胞),下室加入FBS或者某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室迁移。对进入下室的细胞进行计数可反映肿瘤细胞的迁移能力。

  Transwell细胞侵袭实验

  常用8.0、12.0μm孔径的膜,原理与transwell迁移实验类似。上室种细胞(一般为肿瘤细胞),下室加入FBS或者某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室运动。但是与迁移实验不同的是,本实验中,聚碳酸酯膜上室侧铺有一层基质胶,用以模拟体内细胞外基质。细胞要想穿过透性膜进入下室,需要先分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方能通过聚碳酸酯膜。对进入下室的细胞进行计数即可反应细胞的侵袭能力。

  二、Transwell 细胞迁移实验步骤

  1、配制结晶紫染液: 取结晶紫0.05g溶于甲醇制成0.5%的结晶紫溶液,用时用PBS溶液1:5稀释成0.1%的结晶紫染液。

  2、细胞离心:将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成1×105个/ml的细胞悬液。

  3、下室加培养基:Transwell板中加入500μl含20% FBS的完全培养基,将小室放入板中。

  4、上室接种细胞:在transwell小室中加入200μl 的细胞悬液,将Transwell板37℃下于CO2(含量5%)培养箱中培养24h。

  5、染色:将小室取出,用PBS洗去培养基,结晶紫染色10min;自来水将表面的结晶紫洗除干净,用棉签将上室中接种侧的细胞擦除干净,于显微镜下对非细胞接种侧拍照。

  三、Transwell 细胞侵袭实验步骤

  1、配制结晶紫染液: 取结晶紫0.05g溶于甲醇制成0.5%的结晶紫溶液,用时用PBS溶液1:5-8成0.1%的结晶紫染液。

  2、transwell侵袭孔的制备:将BD matrigel和 无血清培养基以1:8的比例稀释,吸取80μl加入transwell的上室中,放置于培养箱中至少2h。

  3、细胞离心:将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成5×105个/ml 的细胞悬液。

  4、下室加培养基:Transwell板中加入500μl含20% FBS的完全培养基,将小室放入板中。

  5、上室接种细胞:在transwell小室中加入200μl 的细胞悬液,将Transwell板37℃下于CO2(含量5%)培养箱中培养48h。

  6、染色:将小室取出,用PBS洗去培养基,结晶紫染色10min;自来水将表面的结晶紫洗除干净,用棉签将上室中接种侧的细胞擦除干净,于显微镜下对非细胞接种侧拍照。

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