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PI染色

货号:GC1024

品牌:Servicebio

价格:¥0

规格:

简介: PI染色试验操作说明
1. 培养的单层细胞或孵育过荧光抗体的组织切片等。0.01mol/L PBS漂洗三次,每次5min。
2. 加PI工作液,室温避光孵育10min(可根据实验材料的染色结果而定)。
3. PBS漂洗三次,每次5min。
4. 水溶性封片剂封片后荧光显微镜下观察。

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  PI染色试验操作说明

  1.培养的单层细胞或孵育过荧光抗体的组织切片等。0.01mol/L PBS漂洗三次,每次5min。

  2.加PI工作液,室温避光孵育10min(可根据实验材料的染色结果而定)。

  3.PBS漂洗三次,每次5min。

  4.水溶性封片剂封片后荧光显微镜下观察。

  结果:正常细胞一般不会被染上颜色,细胞发生凋亡时,细胞核呈红色荧光。如果细胞经破膜处理后再染色,所有细胞核均可看到红色荧光。

  流式周期实验操作说明

  1、加入1ml 0.25%胰酶消化细胞,待细胞变圆且有部分细胞悬浮,即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞,使细胞悬浮。

  2、细胞悬液转入离心管中,1500rpm离心5min收集细胞。

  3、沉淀用3mlPBS重悬,1500rpm离心5min收集细胞。

  4、沉淀中缓慢加入-20℃预冷的90%乙醇,重悬细胞,冰浴过夜。

  5、1500rpm离心5min收集细胞,PBS重悬,离心收集细胞。

  6、加入250ul PBS重悬细胞。

  7、加入2μl浓度为1mg/ml的RNaseA(去离子水配制),37℃水浴40min。

  8、加入50µl浓度为100µg/ml的PI染色液,避光染色20min。

  9、上机检测及结果处理。流式细胞仪激发波长为488nm,用Cell Quest及Modfit软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。

  注意事项:

  1.PI对人体有刺激性,操作时请穿实验服并带手套。

  2.荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。

  3.为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片剂封片,抗荧光淬灭封片剂可以向武汉谷歌生物订购。