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胰蛋白酶消化液(不含EDTA,含酚红)

货号:G4005

品牌:Servicebio

价格:¥100

规格: 100ml

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  产品简介:

  胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶(2.5g/L porcine trypsin in Hank's Balanced Salt Solution with phenol red),不含Ca2+和Mg2+。该消化液已用0.22μm滤膜过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。

  在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解,使组织或贴壁细胞分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶,溶于无钙镁平衡盐(HBSS)溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。

  本产品含酚红指示剂

  包装内容:

产品货号 产品名称 规格
G4005 胰蛋白酶消化液(不含EDTA,含酚红) 100ml

  保存条件:

  -20℃保存,有效期12个月。

  使用方法:

  1.贴壁细胞的消化:

  (1)吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。

  (2)加入少量胰蛋白酶消化液,盖过细胞即可,室温放置至细胞变圆,解离脱落。

  HeLa细胞测试消化效果:将培养至约90%汇合度(90% confluence)的HeLa细胞弃掉培养基,用HBSS或PBS洗2次后,加入适量(能刚好完全浸润细胞)的0.25%胰酶-无EDTA消化液,室温条件下消化5-7min,可在显微镜下观察到细胞变圆解离,肉眼下可看到液体中有大量细胞脱落,加入培养基终止消化。

  293T细胞测试:将培养至约90%汇合度(90% confluence)的293T细胞弃掉培养基,用HBSS或PBS洗1次后,加入适量(能刚好完全浸润细胞)的0.25%胰酶-无EDTA消化液,室温条件下消化5-7min,可在显微镜下观察到细胞变圆解离,肉眼下可见大量细胞脱落,即可加入培养基终止消化。

  不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

  (3)显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

  (4)如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶-无EDTA消化液重新消化。

  (5)如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

  2.组织的消化:不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。

  注意事项:

  1.由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;

  2.本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染;

  3.不宜4℃长期保存,切忌反复冻融,小量使用时建议分装冻存;

  4.由于Hank’s balance solution含0.35g/L的NaHCO3,在CO2培养箱中(CO2浓度5%-10%)会迅速变酸,因此37℃消化不宜放入CO2培养箱。