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BCA蛋白定量检测试剂盒

货号:G2026-1000T

品牌:Servicebio

规格: 1000T

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  产品简介:

  本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前广泛应用的蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成。其操作简单,灵敏度高,所形成的颜色复合物稳定性佳,受干扰物质影响小。可检测浓度下限达25 μg/mL的蛋白样品,最小检测蛋白量达到0.5 μg,待测样品体积为1-20 μL。 本产品主要成分为:BCA二钠盐,无水碳酸钠,酒石酸钾,氢氧化钠,碳酸氢钠和硫酸铜。

  包装内容:

产品货号 产品名称 规格
G2026-1 BCA试剂 40 mL/100 mL×2
G2026-2 硫酸铜溶液 1.2 mL/1.2 mL×5
G2026-3 蛋白标准品(BSA)(4℃) 25 mg/25 mg×5
G2026-4 蛋白标准配制液 1.5 mL/1.5 mL×5

  保存条件:

  整套试剂常温保存,有效期12个月。蛋白标准品4℃保存,溶解后应放-20℃保存。

  使用方法:

  1.取1 mL蛋白标准配置液加入到25 mgBSA的蛋白标准管中,完全溶解蛋白标准品,即为25 mg/mL的蛋白标准溶液。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。

  2.取适量25 mg/mL蛋白标准溶液,稀释至终浓度为0.5 mg/mL。标准品最好与蛋白样品用同样的溶液稀释。但为了简便起见,通常使用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。

  3.做标准曲线。将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μL加到96孔板中,不足20 μL的加标准品稀释液补足到20 μL。

  4.将待测的蛋白样品稀释至合适浓度,加到96孔板中,使待测样品总体积也为20 μL。

  5.根据样品数量,按50体积BCA试剂加1体积硫酸铜溶液(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。

  6.每孔加入BCA工作液200 μL,充分混匀(可将酶标板放在振荡器上振荡30s),37℃放置30 min后,以标准曲线0号做参比,在562nm波长下比色测定,记录各孔吸光度值。(注:也可以在室温放置2 h,或60℃放置30 min。如果蛋白浓度较低,最好放在60℃条件下反应。)

  7.以标准品蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20 μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

  注意事项:

  1.BCA法测定蛋白浓度受温度和时间的影响较大,吸光度值会随着时间的延长不断升高,且显色反应会因温度的升高而加快。如果不能精确控制显色反应的时间和温度,建议每次测定都需要做标准曲线。

  2.本试剂也适用与分光光度计测定,但需要根据测定的最小体积调整样品和BCA工作液的用量。

  3.为保证蛋白的精确定量,样品的提取和标准蛋白的配制最好选用相同的缓冲液,同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值,建议使用其他的方法测定。

  4.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,Tween 60,Tween 80。但在样品含有脂类物质时将明显提高吸光度值。且受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇或β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用其他方法测定。

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